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抗小鼠INS抗體與結合在包被抗體上的小鼠INS結合、生物素與親和素特異性結合而形成。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值，INS濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣品中INS的濃度。

小鼠ELISA試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法，用抗小鼠INS抗體包被于酶標板上，實驗時樣品或標準品中的小鼠INS會與包被抗體結合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠INS抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。

Elisa試劑盒實驗反應時間注意事項：

1、在備孔稀釋好待測樣品和標準品；

2、上板:應從后一孔上完板開始計時，以確保反應時間；

3、加底物：應從加第一孔開始計時，以確保加終止液時的反應時間是5分鐘。

小鼠ELISA試劑盒注意事項：

1. 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

2. 實驗中不用的試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

1. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

2. 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

3. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

4. 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

5. 底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，實驗完成后應立即讀取OD值。

6. 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

7. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

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