ELISA試劑盒每次提蛋白后會(huì)將樣品在短時(shí)刻內(nèi)重復(fù)2-3次WB，可是每次跑出的條帶趨勢(shì)不共同，上樣量和其他條件都沒(méi)有變，內(nèi)參根本是規(guī)整安穩(wěn)的，不知道為什么意圖條帶就是不共同？
首要內(nèi)參安穩(wěn)闡明上樣量安穩(wěn)（應(yīng)該大致是一樣的），所以不存在什么上樣量不一樣的問(wèn)題；呈現(xiàn)這樣的成果，問(wèn)題出在每一步都有一定的可能性，比如電泳，轉(zhuǎn)膜，敷抗體，顯色等等。但據(jù)我所知，WBzui要害的仍是轉(zhuǎn)膜和敷抗體步驟，可能是你敷抗體的時(shí)分敷的不均勻。我的主張是你再認(rèn)認(rèn)真真，仔仔細(xì)細(xì)做幾遍，很可能重復(fù)性就做出來(lái)了。僅僅個(gè)人觀點(diǎn)。  
ELISA試劑盒根本操作的問(wèn)題我們沒(méi)必要去考慮。我認(rèn)為問(wèn)題的要害在于成像的進(jìn)程。同一張膜，本人能夠在成像的時(shí)分，做出*不同的圖片成果。顯色液的滴加，量，以及曝光時(shí)刻，條帶色彩（要求灰色而不是黑色）。所以有圖片闡明問(wèn)題。  
說(shuō)是內(nèi)參共同，而意圖條帶每次都不一樣，我想說(shuō)原因可能是在顯影液環(huán)節(jié)，簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)就是你的膜沒(méi)有淋潔凈，上面殘留參差不齊的T/TBS，T/TBS能稀釋顯影液，意圖條帶正本表達(dá)量就少，某一個(gè)點(diǎn)殘留的T/TBS略微多一點(diǎn)就可能導(dǎo)致顯影作用下降，所以主張?jiān)陲@影液反響前，盡量將膜上的洗膜液淋掉（當(dāng)然也不能讓膜干了，要是實(shí)驗(yàn)室富裕的話(huà)，也能夠多添點(diǎn)顯影液，作用一樣），期望對(duì)你有協(xié)助。  
可能觸及幾個(gè)原因：1，拔梳子時(shí)膠錯(cuò)動(dòng)，參加樣本后進(jìn)入其他孔或漏出。由于內(nèi)參表達(dá)高，可能不會(huì)顯示出差異。2，參加樣本時(shí)不均勻也可能會(huì)發(fā)生差錯(cuò)。3，制膠應(yīng)確保均勻無(wú)氣泡，玻璃板潔凈，這樣才干確保成果共同牢靠。
ELISA試劑盒盡管用WB做出一張滿(mǎn)足的成果觸及多個(gè)環(huán)節(jié),但向上面你說(shuō)到的內(nèi)參沒(méi)有問(wèn)題,闡明各項(xiàng)操作根本是過(guò)關(guān)的,據(jù)我猜想很可能是zui終一步曝光呈現(xiàn)的問(wèn)題,加發(fā)光液反響的時(shí)刻及曝光的時(shí)刻都會(huì)對(duì)zui終的成果發(fā)生影響, 還有一種可能你的發(fā)光液的安穩(wěn)性或許不太好,期望對(duì)你有所協(xié)助,哪里說(shuō)的不對(duì)也請(qǐng)多指導(dǎo).