ELISA試劑盒就酶標抗體自身而言，它的有用作業濃度是指與其相應抗原包被的載體作實驗時，能得到陽性反響的zui高稀釋度。例如某一HRP：抗人IgG制劑標明的作業濃度為1:5000，ELISA試劑盒表明該制劑經 1:5000稀釋后，在與人IgG包被的固相作ELISA實驗時，將發作陽性反響。但在用于具體的ELISA檢查中，酶標的zui適作業濃度受到固相載體的性質、包被抗原或抗體的純度以及整個檢查系統如標本、反響溫度和時刻等的影響，因而有必要在實際測定條件下進行"滴配"挑選能到達高敏感度的zui大稀釋度作為試劑盒中的作業濃度。 
還有有的包被原也許不是蛋白，ELISA試劑盒關于生物素和脂類物質或小分子物質咱們要事前對其改造再加以包被，親和素生物素:先親和素先包被載體，ELISA檢查試劑盒參加生物素化的DNA，這種包被辦法均勻、結實，ELISA檢查試劑盒已擴展應用于各種抗原物質的定量測定。這種物理吸附長短特異性的，ELISA試劑盒受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質較小分子蛋白質一般含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體外表。ELISA檢查試劑盒小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯后才干固定在固相載體上。
物制得后，在用作ELISA試劑盒前需要斷定其恰當的作業濃度。運用過濃的物，既不經濟，又可使本底增高；物的濃度過低，則又影響檢查的敏感性。所以有必要對物的濃度予以挑選。zui適的作業濃度就是指物稀釋至這一濃度時，能保護一個低的本底，并取得測定的靈敏度，到達zui合適的測定條件和測定費用的節約。